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無菌操作基本技術

作者: 發布于:2017-9-15 14:24:34 點擊量:

 1. 實驗進行前,無菌室及無菌操作臺(laminar flow) 以紫外燈照射30-60 分鐘滅菌,以70 % ethanol 擦拭無菌操作抬面,并開啟無菌操作臺風扇運轉10 分鐘后,才開始實驗操作。每 次操作只處理一株細胞株,且即使培養基相同亦不共享培養基,以避免失誤混淆或細胞間 污染。實驗完畢后,將實驗物品帶出工作臺,以70 % ethanol 擦拭無菌操作抬面。操作間 隔應讓無菌操作臺運轉10 分鐘以上后,再進行下一個細胞株之操作。

 2. 無菌操作工作區域應保持清潔及寬敞,必要物品,例如試管架、吸管吸取器或吸管盒等可 以暫時放置,其它實驗用品用完即應移出,以利于氣流之流通。實驗用品以70 % ethanol 擦 拭后才帶入無菌操作臺內。實驗操作應在抬面之中央無菌區域,勿在邊緣之非無菌區域操 作。

3. 小心取用無菌之實驗物品,避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口,亦不要在打 開之容器正上方操作實驗。容器打開后,以手夾住瓶蓋并握住瓶身,傾斜約45° 角取用, 盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。

4. 工作人員應注意自身之安全,須穿戴實驗衣及手套后才進行實驗。對于來自人類或是病毒 感染之細胞株應特別小心操作,并選擇適當等級之無菌操作臺(至少Class II)。操作過程 中,應避免引起aerosol 之產生,小心毒性藥品,例如DMSO 及TPA 等,并避免尖銳 針頭之傷害等。

 5. 定期檢測下列項目: 5.1. CO2 鋼瓶之CO2 壓力 5.2. CO2 培養箱之CO2 濃度、溫度、及水盤是否有污染(水盤的水用無菌水,每周更換)。 5.3. 無菌操作臺內之airflow 壓力,定期更換紫外線燈管及HEPA 過濾膜,預濾網(300 小時/預濾網,3000 小時/HEPA)。

 6. 水槽可添加消毒劑(Zephrin 1:750),定期更換水槽的水。




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