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菌種活化的操作方法

作者: 發布于:2017-10-23 14:06:14 點擊量:

 低溫保存管中之一般菌種臨時存放及活化

A. 低溫保存管之臨時存放及解凍中之一般菌種臨時存放及活化

1. 低溫保存管(cryo tube)應存放于-20℃ ~ -80℃之低溫條件下。

2. 準備 37℃之 70﹪(V/V)酒精浴槽(只能在電氣水浴槽中改放酒精,不可以火加溫,以免危險;若以 37℃水浴取代,應避免水中微生物污染),其中事先安放小試管架(可放置 cryo tube 之大。,液面不可高達管塞。

3. 將 cryo tube 從低溫保存條件中取出,置于 37℃浴槽之小試管架上。

4. 不斷輕微搖動 cryo tube,液面不可高至管塞,直至結冰完全溶解(約需 2 分鐘)。

B. 菌株活化: 在無菌操作下 

1. 用無菌微量吸管,從已溶解之cryo tube 吸取 1-2滴之菌液,滴入固態指定培養基(培養基編號及溫度示于菌株訂購單)某一邊緣附近,以劃線法接種于培養基。

2.將接種好的培養基置于指定溫度的培養箱中培養。

C. 劃線法

1. 手持金屬接種環,用酒精燈將接種環(共約5公分)燒至火紅,并不斷來回燒烤金屬固定桿之前約10公分,等待約10秒鐘,將接種環前端輕觸培養基邊緣凝膠(無菌體部份),待接種環完全冷卻后,以環沾黏菌滴,由培養基邊緣向中央輕輕橫劃緊接的并行線,直到涵蓋1/3培養基為止(I區)。 

2. 灼燒接種環,待數秒冷卻后,旋轉培養基自I區涂布的邊緣再橫劃數條線到未接種的區域(II區)。

3. 重復2的動作完成III 區與IV 區。

4. 灼燒接種環,將接種環歸位。

D. 圖示

(1)金屬接種環

 

(2)平板劃線法

冷凍干燥管之開管說明

下列步驟請在無菌環境下操作:

 1、以沾有70%酒精的棉花,擦拭外管,在火焰上加熱外管之尖端。

 2、滴數滴無菌水于加熱處,使外管破裂,再以硬棒敲破尖端。

 3、取出隔熱纖維紙和內管,以滅菌過的鑷子取出內管之棉塞。

 4、( a ) 適用于細菌  用無菌吸管,吸取0.3-0.5 ml指定之液體培養基,滴入內管內,并輕微震蕩(可用該吸管協助),直到均勻懸浮。( b ) 適用于霉菌、酵母菌  用無菌吸管,吸取0.3-0.5 ml無菌水,滴入內管內,待干燥粉末溶解后,以無菌吸管吸取并滴入約含有5ml無菌水之試管內,輕微震蕩使其均勻后,靜置30至60分鐘。

 5、取0.1-0.2 ml之菌體懸浮液于指定的平板培養基上,做劃線分離培養或做成一系列之稀釋,用無菌L型玻棒均勻涂抹,以檢驗菌種之純度及活化情形,而剩余的菌體則全部移入指定的液體培養基內,并依指定的溫度培養之。

 6、某些菌種經過冷凍干燥保存后,遲滯期 ( lag period ) 較長,必須等培養二倍時間后才能長出,且再經過一、二次繼代培養 (Subculture) 后才能正常生長。經過以上的努力后仍培養失敗,才視為不能活化。

 7、若菌種未能活化,或活化之菌落有疑問時,請于收到菌種之一個月內,以問題菌株反應單傳真至本中心,即進行處理。

 8.未開封之冷凍干燥管,請冷藏于4℃冰箱,切勿冷凍保存。




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