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微生物檢測中培養基的質量控制措施

作者: 發布于:2018-1-3 9:14:20 點擊量:

 1 培養基的購置與驗收

1.1 購置

    從培養基自身的質量來看,不同生產廠家的產品,甚至同一廠家不同批號的產品都會存在差異。依據ISO/IEC17025《檢測和校準實驗室能力的通用要求》,對培養基的供應企業進行評價后選擇合格的供應商,這是培養基購買過程中重要的步驟。應選擇產品市場信譽度高、有質量保證能力和服務保證能力的企業;企業是否通過了質量管理體系的認證是較為客觀的評價指標。要求生產企業提供:培養基成分名稱及產品編號、批號、使用前的pH、儲藏信息和有效期、性能評價和所用測試菌株、技術數據清單、質控證書以及必要的安全/危害數據等材料。

1.2 驗收

    購買的培養基到貨后,應有專人做好接受和驗收工作,應仔細核對生產企業提供的資料、培養基名稱、規格數量、外觀特征、批號、保質期是否符合要求。每批培養基到貨物后都應對培養基的質量進行檢測,滿足檢測方法規定的要求后方可投入使用。

2 培養基的儲存

    干粉培養基應保存在陰涼干燥處,要避免陽光直射;未開瓶的培養基保存期限應按照生產廠家提供的信息執行,開瓶后的干粉培養基易吸濕,應注意防潮并盡快用完。應定期對儲存中的培養基進行常規檢查,如容器密閉性復查、首次開封日期、內容物的感官檢查,如果培養基發生結塊、顏色異常和其他變質跡象就不能再使用。

3 培養基的制備

3.1 培養基用水

    培養基制備用水應使用電阻率不小于30萬Ωcm的蒸餾水或與其同質的水,最好不使用離子交換器生產的去離子水。

3.2 稱量

    稱量時要用專用的角匙,避免交叉污染而影響檢驗結果;干粉培養基易吸潮,如有條件,盡量在濕度較低的房間稱取培養基。

3.3 復水

    復水時不得用銅鍋或鐵鍋,以防有離子混入培養基中,影響微生物的生長;容器的大小需大于復水后培養基總體積的2倍以上,避免在加熱溶解過程中,培養基溢出;含有瓊脂粉的培養基,在加熱溶解之前可以浸泡數分鐘;加熱培養基時一定要進行攪拌,特別是瓊脂類培養基。為避免燒焦和沸騰溢出,對于少量的培養基最好使用沸水浴進行加熱。燒糊的培養基營養物質被破壞,并可產生有毒物質,如發現焦化,或未溶解均勻前培養基有溢出,該培養基即不能使用,應重新制備。

3.4 滅菌

    一般培養基采用濕熱滅菌,即高壓蒸汽滅菌,通常是121℃ 15 min,含糖或特殊培養基,按照國家標準或生產商提供的說明滅菌。已配制好的培養基必須立即滅菌,避免微生物生長繁殖而消耗養分,改變培養基的酸堿度。高溫可破壞培養基的營養成分,還會使瓊脂的凝膠強度下降,因此必須嚴格控制滅菌溫度和時間,并且不可重復滅菌。高壓蒸汽滅菌鍋的壓力表等要定期進行檢定,并定期采用生物指示菌法或化學變色紙片對滅菌效果進行驗證。

3.5 pH測定

    微生物必須在適宜的pH范圍內才能正常生長繁殖或體現其生物特性。培養基配方要求的pH為滅菌或消毒后的pH 值,即培養基使用前的pH,并應在25℃溫度下采用精密酸度計進行測量,固體瓊脂培養基應以特殊的膠體表面測量電極進行測量。使用過程中,如果需要調整培養基的pH,應用1mol/L Na0H或 lmol/L HCL調整,注意不可反復調pH,否則會影響培養基的滲透壓。

3.6 配制好的培養基保存

    滅菌以后培養基應該迅速冷卻至所需溫度,避免長時間保存在滅菌鍋內,造成過度滅菌,影響培養基的營養成分或選擇性效果。所配制的培養基的量,應該是在最長保存期限內正好使用完。含染料的培養基應閉光保存;倒好的瓊脂平板如果配制的當天未使用完,應于冷藏保存,如果保存時間超過2天,應將其放入密封的塑料袋中保存。

4 培養基的性能測試

4.1 外觀控制

    制備好的培養基應有相應的顏色,一般的培養基應澄清、無渾濁、無沉淀。使用前應檢查培養基的顏色是否發生變化,是否蒸發/脫水。

4.2 污染控制

    從每批制備好的培養基中選取部分進行污染測試(無菌試驗),確定無微生物生長方可使用。

4.3 性能測試

4.3.1 測試菌株選擇 測試菌株是具有其代表種的穩定特性并能有效證明實驗室特定培養基最佳性能的一套菌株,應來自國際/國家標準菌種保藏中心ATCC標準菌株,菌株的選擇參考衛生行業標準WS/T232-2002《商業性微生物培養基質量檢驗規程》。

4.3.2 定量測試方法 改良Miles-Misra法 測試菌株過夜培養物10倍遞增稀釋;測試平板和參照平板劃分為4個區域并標記;從最高稀釋度開始,分別滴一滴稀釋液于試驗平板和對照平板標記好的區域;將稀釋液涂滿整個1/4區域,37°C培養18小時;對易計數的區域計數,按公式計算生長率(生長率=待測培養基平板上得到的菌落總數/參考培養基平板上獲得的菌落總數)。非選擇性培養基上目標菌的生長率應不低于0.7,該類培養基應易于目標菌生長;選擇性培養基上目標菌的生長率應不低于0.1 。

4.3.3 半定量測試方法 改進的劃線法接種法 平板分ABCD四區,共劃16條線,平行線大概相隔0.5cm,每條有菌落生長的劃線記作1分,每個僅一半的線有菌落生長記作0.5分,沒有菌落生長或生長量少于劃線的一半記作0分,分數加起來得到生長指數G。目標菌在培養基上應呈現典型的生長,而非目標菌的生長應部分或完全被抑制,目標菌的生長指數G大于6時,培養基可接受 。

4.3.4 定性測試方法 平板接種觀察法 用接種環取測試菌培養物,在測試培養基表面劃平行直線。按標準中規定的培養時間和溫度對接種后的平板進行培養,目標菌應呈現良好生長,并有典型的菌落外觀、大小和形態,非目標菌應是微弱生長或無生長 。

5 討論

    培養基的質量是微生物實驗室檢測工作的基礎,事關檢測工作的準確性、可靠性,在微生物實驗室檢測工作中舉足輕重。如果在工作中忽視任何一個環節的質量問題,都將導致檢驗結果科學性、客觀性的偏離。因此,加強培養基的實驗室質量控制,認真地做好培養基的質控工作,不斷完善和提高培養基的質控水平,才能為微生物檢測實驗室提供高質量的培養基。




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